「透明骨格標本」を編集中 (節単位)

== 手法 ==
[[ファイル:Transparent frame specimen.jpg|thumb|120px|[[ジンドウイカ]]のアルシアンブルー染色標本。特定の構造が染まらず、全体が青く染まっている。]]
透明骨格標本を作製するにはいくつかの手法・試薬があるが、代表的なものを下記に示す。
=== 固定・染色 ===
まず標本の[[タンパク質]]を[[ホルマリン]]のような[[アルデヒド]]性の固定液を用いて[[固定 (組織学)|固定]]し、タンパク質分子内外にしっかりと[[分子]]間の[[架橋]]を形成させる。

次に、[[アルシアンブルー]]で軟骨を染色する。アルシアンブルーは、酸性[[多糖類]]の[[硫酸基]]と結合する性質を持った青い色素で、軟骨に多く含まれるムコ多糖類の一種、[[コンドロイチン硫酸]]などと結合する。このため軟骨部分が特に著しく青く染まることになる。ただし、ムコ多糖類は必ずしも軟骨にのみ局在しているわけではないため、試料によっては一見非特異的な染色になることがある。例えば、酸性を呈する軟骨染色液による染色に時間をかけすぎるなどの理由で硬骨の[[脱灰]]によるリン酸カルシウムの喪失が著しく進行してしまうと、後述の硬骨染色が不全に終わり、硬骨の細胞外マトリクスのムコ多糖類に対するアルシアンブルー染色が卓越して全骨格があたかも軟骨であるかのような仕上がりとなってしまう。

次に、[[アリザリンレッドS]]で硬骨を染色する。アリザリンレッドSは紫色の色素であるが、[[金属]][[イオン (化学)|イオン]]と結合して赤く発色する。硬骨には燐酸カルシウム（[[燐灰石]]）の[[結晶]]が沈着しているため、この結晶内の[[カルシウム]]イオンとアリザリンレッドSが結合し、硬骨が赤く染色されるわけである。アルシアンブルー同様、アリザリンレッドはあくまで金属イオンと結合するため、カルシウム沈着した魚鱗（そもそも皮骨性の骨格系の構成要素ではあるが）なども強く赤色で染色される。

=== 透明化 ===
染色が終わった標本は[[水酸化ナトリウム]]や[[水酸化カリウム]]のような強[[アルカリ]]の[[水溶液]]や[[プロテアーゼ]]の水溶液の中で、タンパク質の[[ペプチド結合]]を[[加水分解]]してやる。タンパク質分子の間は、既に[[側鎖]]の[[アミノ基]]の部分でホルマリンの[[ホルムアルデヒド]]によって架橋されているため、この分子間架橋のネットワークが残存し、組織は外形を残しつつ適度にすかすかになる。最後にこの標本の中の[[水分]]を[[グリセリン]]で置換してやると、軟組織はほぼ完全に透明化し、赤く染まった硬骨と青く染まった軟骨が外部から容易に観察できるようになる。

この方法では体内に[[脂肪組織]]の発達した比較的大型の動物を透明化することは困難であるが、[[キシレン]]による[[脱脂]]で透明化を実現できる。

なお、[[ヤツメウナギ]]などいくつかの動物では特にアルシアンブルーによる軟骨染色がうまくいかないことが多い。